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禽流感系列诊断技术
日期:2014-09-01 作者: 来源:中国农业科学院 点击:
 特点特性:禽流感的诊断技术分为病原学检测方法和血清学检测方法,病原学检测方法是指检测禽流感病毒或者基因的方法,血清学方法是指检测禽流感病毒引起的血清反应。 

1、禽流感病毒的分离:死禽样本一般采集脑、肺、肝脏等;活禽样本可采集气管拭子、泄殖腔拭子。采集的样本密封后,放在加冰块的保温桶内,尽快送往实验室。取 9日龄~11日龄发育良好的SPF鸡胚,每个样本接种3枚~5枚,每枚尿囊腔内接种 0.1毫升,35℃~37℃条件下孵化3天~7天。收获前,鸡胚放在4℃条件下冷却4小时或过夜。收获24小时后死亡的鸡胚和活胚的尿囊液,3000转/分钟离心5分钟去除血细胞,进行血凝试验。该方法被列入国家标准(GB/T 18936-2003)。 

经济效益:该方法属于诊断技术,对安定社会,促进养殖业健康发展有重要意义。 

适用推广范围:生物安全三级实验室 

推广前景:目前是全世界公认的禽流感诊断方法之一,被认为是最可靠的诊断标准。 

2、禽流感病毒的血凝实验:HA试验是对收获的鸡胚尿囊液进行一系列不同浓度稀释,加入等体积的一定稀释度的鸡红细胞,观察血凝情况。如果收取的尿囊液没有血凝价,继续盲传2代;如果有血凝活性,应通过血凝抑制试验确定分离的病毒。通常禽流感、禽副粘病毒(如ND)、禽腺病毒等都具有血凝活性,因此证明尿囊液样本具有血凝活性后,还要进一步确定是哪些抗原在起作用。通过 HI试验来鉴定,如果抗 AIV等的血清能够抑制 HA,证明有 AIV存在。分离病毒被鉴定为 A型禽流感病毒后,应进一步确定其H亚型。流感病毒有 16个 H亚型,可以分别通过 HI试验来鉴定。新分离的禽流感病毒还要进行毒力测定,一般需要专业实验室能完成这项工作。 

经济效益:该方法属于诊断技术,对禽流感的初步筛查是必不可少的。 

适用范围:一般需要在鸡胚进行病毒增殖后,用来检测培养物是否具有血凝性,是禽流感病毒检测中的一个重要环节。 

推广前景:目前是全世界公认的禽流感诊断方法之一。 

3、免疫荧光技术:常用直接荧光抗体法,即在组织触 (印 )片上直接染色,以荧光显微镜检查荧光。一种AIV的荧光抗体可以用来检测同亚型的病毒。荧光抗体技术用于诊断,具有快速、简便、敏感等特点,而且费用较低。需要注意的是,如何避免或降低标本中出现的假阳性问题(非特异性荧光)。 

经济效益:该方法属于诊断技术,对禽流感的现地诊断是很有用的,基层实验室大多能够使用该方法对可疑样品进行检测。 

适用推广范围:适合基层兽医诊断实验室利用该方法检测病原。 

推广前景:是全世界公认的禽流感诊断方法之一。 

4、琼脂扩散试验:是一种免疫沉淀反应。抗原 ,抗体在含有电解质的琼脂凝胶中 ,可以向四周自由扩散 ,在最适比例处出现沉淀线。常采用已知抗原检测相应的沉淀抗体。该方法用于判定 A型禽流感抗体阳性是否阳性,不能用于亚型的鉴别,方法简单,敏感性低。 

经济效益:该方法属于诊断技术,对禽流感的现地诊断是很有用的,基层实验室或者养禽场都可使用,该方法用于对血清样品检测。 

适用范围:适合基层兽医诊断实验室用该方法可以测定禽流感血清是否阳性。推广前景:是全世界公认的禽流感诊断方法之一。 

5、免疫酶检测技术:是用酶来标记抗原或抗体,通过显色反应来检测相应抗体或抗原的一种方法。分为直 

接 ELISA和间接 ELISA两种。 
经济效益:该方法属于诊断技术,基层实验室或者养禽场都可使用,但是目前由于方法本身存在不稳定性,甚少使用。 

适用推广范围:适合基层兽医诊断实验室或者养禽场用该方法可以测定禽流感血清是否阳性。推广前景:是需要继续完善的禽流感诊断方法之一。 

6、禽流感病毒的 RT-PCR检测方法:反转录酶链式反应(RT-PCR)方法是一种快速诊断技术,可用于核酸的检测和亚型的鉴定。根据 RT-PCR的原理和方法的不同,又分为常规PCR、套式PCR、多元PCR、荧光 PCR等。目前常规 PCR已成为鉴定禽流感病毒基因的一种重要技术,我国已制定了禽流感病毒通用RT-PCR,H5、H7及 H9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的农业行业标准。 

经济效益:该方法目前被列为禽流感病原学监测的指定方法,在日常监测和疫情诊断中都有应用。 

适用推广范围:适合省、市、基层兽医诊断实验室或者养禽场使用,该方法可以测定禽流感病毒是否阳性。 

推广前景:目前在各省、市兽医卫生防疫机构中普遍应用。 

总之,对禽流感的诊断,实验室病毒的分离、鉴定以及致病性试验都耗时较长,费用也较高,分子生物学检测快速、敏感性高,这些诊断检测只有极少数的实验室能够进行。禽流感这类疫病的确诊越快、越早,损失就越小。当怀疑有禽流感发生时,应及时上报疫情,及时送到国家指定的实验室进行诊断是十分重要的。 



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采编:guoq

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